نتيجتان تجيبان عن سؤالين مختلفين
يعرض تقرير تحليل الببتيد عادة نتيجتين تحليليتين جنبًا إلى جنب: نسبة نقاوة من الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC)، ونتيجة مطياف الكتلة (MS). تفصل HPLC مكونات العينة وتبيّن مقدار الإشارة المرصودة الواقع في القمة الرئيسية. ويقيس مطياف الكتلة كتلة الجزيئات الموجودة ويبيّن ما إذا وُجدت كتلة تتفق مع المركّب المتوقع. اقرأ كل نتيجة بحسب ما تقيسه، فلا تغني إحداهما عن الأخرى.
| البند | نقاوة HPLC | مطياف الكتلة |
|---|---|---|
| ما الذي يُقاس | حصة الإشارة المرصودة، وهي عادة امتصاص الأشعة فوق البنفسجية، الواقعة في القمة الرئيسية، كنسبة مئوية من المساحة. | نسبة الكتلة إلى الشحنة (m/z) للأيونات المتكونة من العينة. |
| ما الذي تدعمه | أن العينة لا تحتوي إلا على القليل من المكونات الأخرى التي تفصلها الطريقة وترصدها. | وجود جزيء بالكتلة المتوقعة. |
| ما لا تبيّنه وحدها | أي مركّب تمثله القمة الرئيسية؛ والماء والأيونات المضادة وكل ما لا يراه الكاشف. | مقدار ما يشكله هذا الجزيء من العينة، أو أي الجزيئين المتساويين في الكتلة هو الموجود. |
| في تقرير BC10 | Purity (LCMS/HPLC): 99.87% (المواصفة ≥ 99.0%) | Mass Spectrum: Detected (المواصفة: Conforms to [M+2H]2⁺, [M-H]-) |
ماذا تعني نسبة نقاوة HPLC
في HPLC بالطور العكسي تمر العينة المذابة عبر عمود معبأ، وتخرج مكوناتها منه في أوقات مختلفة. ويسجّل الكاشف، وهو غالبًا كاشف امتصاص للأشعة فوق البنفسجية عند طول موجي تمتص فيه الروابط الببتيدية، كل مكوّن على شكل قمة. وتكون قيمة النقاوة عادة مساحة القمة الرئيسية مقسومة على المساحة الكلية لجميع القمم المدمجة.
لهذا الحساب حدود. فهو لا يعدّ إلا ما تفصله الطريقة ويراه الكاشف: الشائبة التي تخرج من العمود مع القمة الرئيسية، أو التي لا تكاد تمتص عند الطول الموجي المختار، لا تخفض القيمة. ولا يظهر الماء والأيونات المضادة على شكل قمم ببتيدية أصلًا، لذا فالنقاوة ليست حصة الببتيد من وزن المسحوق. كما تعتمد القيمة على الطريقة (العمود والتدرج والطول الموجي وإعدادات الدمج)، ولذلك ينبغي قراءتها مع مواصفة التقرير نفسه، ومع الكروماتوغرام إن توفر. احتفظ مع كل قيمة نقاوة بما يلي:
- الطريقة المذكورة في التقرير، مثل HPLC أو LC-MS.
- مواصفة التقرير نفسه لهذه النتيجة.
- الكروماتوغرام، إذا احتجت إلى رؤية القمم بنفسك.
ماذا تعني نتيجة طيف الكتلة
يحوّل مطياف الكتلة الجزيئات إلى أيونات مشحونة ويقيس نسبة كتلتها إلى شحنتها. والببتيدات المحللة بالتأين بالرذاذ الكهربائي تحمل غالبًا أكثر من شحنة، فقد يعطي الجزيء الواحد عدة إشارات. وفي ترميز التقارير يشير [M+2H]2⁺ إلى الجزيء مضافًا إليه بروتونان، ويشير [M-H]- إلى الجزيء ناقصًا بروتونًا واحدًا.
بالنسبة إلى BPC-157 يذكر ملف المركّب الصيغة C62H98N16O22 والكتلة أحادية النظير 1418.7042 Da. ومن ذلك يُتوقع ظهور الأيون [M+2H]2⁺ قرب m/z 710.36 والأيون [M-H]- قرب m/z 1417.70. ويذكر تقرير BC10 النتيجة Detected مقابل المواصفة Conforms to [M+2H]2⁺, [M-H]- ولا يطبع قيم m/z. وإذا احتاجت مراجعتك إلى القيم المرصودة فاطلب الطيف.
تطابق الكتلة دليل قوي على وجود الجزيء المتوقع، لكن النتيجة نوعية. فهي لا تبيّن مقدار ما يشكله هذا الجزيء من العينة، والجزيئات ذات الصيغة الواحدة، مثل ببتيد تبادلت فيه بقيتان موضعيهما، لها الكتلة نفسها. ويتطلب تأكيد التسلسل نفسه تقنيات أخرى، مثل التجزئة في مطياف الكتلة الترادفي (MS/MS).
اقرأ النتيجتين معًا
لا تدعم النقاوة والكتلة إحداهما الأخرى إلا إذا وصفتا العينة نفسها. وفي تحليل LC-MS المقترن تُقاس الكتلة على القمم التي يجري فصلها، مما يربط النتيجتين أوثق من اختبارين مستقلين. ويتبع تقرير ARA-290 10 mg رقم COA-1AvcSX-K-0F الصادر عن PRISTINBIO (الدفعة 20260905) نمط تقرير BC10 نفسه بمواصفة مختلفة: Peptide Purity (HPLC) 99.77 % مقابل ≥ 98.0%، وMass Spectrum: Detected مقابل Conforms to structure.
- تحقق من أن النتيجتين تشيران إلى العينة نفسها والدفعة نفسها.
- احتفظ بكل نتيجة مع طريقتها ومواصفتها الخاصة.
- لا تحوّل نسبة النقاوة إلى كمية، ولا نتيجة الكتلة Detected إلى نقاوة.
التزم بحدود كل تقرير
يغطي كل تقرير العينة والدفعة المطبوعتين عليه فقط. تحقق منه على موقع الجهة المصدِرة وتأكد من تطابق رقم الدفعة مع البضاعة التي تستلمها.
تذكر الجهة المصدِرة (TJQXGD) أن البيانات مقدَّمة من مختبر شريك خارجي، وأنها والمختبر لا يحملان اعتماد CMA/CNAS، وأن هذه الوثيقة ليست لها صفة إثبات قانونية. تذكر الجهة المصدِرة (PRISTINBIO) أن التحليل لأغراض إعلامية فقط ويخص العينة المقدَّمة.
اطلب وثائق الدفعة المحددة في عرض السعر. التقرير يصف الدفعة التي فُحصت فقط، لذا تحقق من أن رقم الدفعة فيه يطابق الدفعة التي تستلمها.
للأبحاث المخبرية فقط. ليس للاستخدام البشري أو الحيواني.