Zwei Ergebnisse, zwei verschiedene Fragen
Ein Peptid-Prüfbericht nennt meist zwei Analyseergebnisse nebeneinander: einen Reinheitswert aus der Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) und ein Ergebnis der Massenspektrometrie (MS). Die HPLC trennt die Bestandteile einer Probe und gibt an, welcher Anteil des erfassten Signals auf den Hauptpeak entfällt. Die MS misst die Masse der vorhandenen Moleküle und zeigt, ob eine zur erwarteten Verbindung passende Masse gefunden wurde. Lesen Sie jedes Ergebnis nach dem, was es misst; das eine ersetzt das andere nicht.
| Punkt | HPLC-Reinheit | Massenspektrometrie |
|---|---|---|
| Was gemessen wird | Der Anteil des erfassten Signals, meist UV-Absorption, der auf den Hauptpeak entfällt, als Flächenprozent. | Das Masse-Ladungs-Verhältnis (m/z) der aus der Probe gebildeten Ionen. |
| Was es stützt | Dass die Probe wenig von anderen Bestandteilen enthält, die die Methode trennt und erfasst. | Dass ein Molekül mit der erwarteten Masse vorhanden ist. |
| Was es allein nicht zeigt | Welche Verbindung der Hauptpeak ist; Wasser, Gegenionen oder alles, was der Detektor nicht sieht. | Welchen Anteil der Probe dieses Molekül ausmacht oder welches von zwei Molekülen gleicher Masse vorliegt. |
| Im Bericht BC10 | Purity (LCMS/HPLC): 99.87% (Spezifikation ≥ 99.0%) | Mass Spectrum: Detected (Spezifikation: Conforms to [M+2H]2⁺, [M-H]-) |
Was ein HPLC-Reinheitswert bedeutet
Bei der Umkehrphasen-HPLC durchläuft die gelöste Probe eine gepackte Säule, und ihre Bestandteile verlassen sie zu unterschiedlichen Zeiten. Ein Detektor, meist ein UV-Detektor bei einer Wellenlänge, bei der Peptidbindungen absorbieren, zeichnet jeden Bestandteil als Peak auf. Der Reinheitswert ist in der Regel die Fläche des Hauptpeaks geteilt durch die Gesamtfläche aller integrierten Peaks.
Diese Berechnung hat Grenzen. Sie erfasst nur, was die Methode trennt und der Detektor sieht: Eine Verunreinigung, die zusammen mit dem Hauptpeak eluiert oder bei der gewählten Wellenlänge kaum absorbiert, senkt den Wert nicht. Wasser und Gegenionen erscheinen gar nicht als Peptidpeaks; die Reinheit ist also nicht der Anteil des Pulvergewichts, der Peptid ist. Der Wert hängt außerdem von der Methode ab (Säule, Gradient, Wellenlänge und Integrationseinstellungen) und ist deshalb mit der Spezifikation des Berichts selbst und, falls verfügbar, mit dem Chromatogramm zu lesen. Halten Sie zu jedem Reinheitswert fest:
- Die im Bericht genannte Methode, etwa HPLC oder LC-MS.
- Die eigene Spezifikation des Berichts für dieses Ergebnis.
- Das Chromatogramm, wenn Sie die Peaks selbst sehen müssen.
Was ein Massenspektrum-Ergebnis bedeutet
Die Massenspektrometrie wandelt Moleküle in geladene Ionen um und misst ihr Masse-Ladungs-Verhältnis. Peptide, die mit Elektrospray-Ionisation analysiert werden, tragen oft mehr als eine Ladung, sodass ein Molekül mehrere Signale liefern kann. In der Schreibweise der Berichte ist [M+2H]2⁺ das Molekül mit zwei zusätzlichen Protonen und [M-H]- das Molekül mit einem Proton weniger.
Für BPC-157 nennt das Profil der Verbindung die Summenformel C62H98N16O22 und eine monoisotopische Masse von 1418.7042 Da. Daraus ist ein Ion [M+2H]2⁺ bei etwa m/z 710.36 und ein Ion [M-H]- bei etwa m/z 1417.70 zu erwarten. Der Bericht BC10 gibt das Ergebnis als „Detected“ zur Spezifikation „Conforms to [M+2H]2⁺, [M-H]-“ an und druckt keine m/z-Werte. Wenn Ihre Prüfung die gemessenen Werte braucht, fordern Sie das Spektrum an.
Eine passende Masse ist ein guter Hinweis darauf, dass das erwartete Molekül vorhanden ist, das Ergebnis ist aber qualitativ. Es sagt nicht, welchen Anteil der Probe dieses Molekül ausmacht, und Moleküle gleicher Summenformel, etwa ein Peptid mit zwei vertauschten Resten, haben dieselbe Masse. Die Sequenz selbst lässt sich nur mit weiteren Verfahren bestätigen, zum Beispiel durch Fragmentierung in der Tandem-Massenspektrometrie (MS/MS).
Beide Ergebnisse zusammen lesen
Reinheit und Masse stützen sich nur dann gegenseitig, wenn sie dieselbe Probe beschreiben. Bei einer gekoppelten LC-MS-Analyse wird die Masse an den getrennten Peaks gemessen, was beide Ergebnisse enger verbindet als zwei unabhängige Prüfungen. Der Bericht ARA-290 10 mg COA-1AvcSX-K-0F von PRISTINBIO (Charge 20260905) folgt demselben Muster wie der Bericht BC10, mit anderer Spezifikation: Peptide Purity (HPLC) 99.77 % gegenüber ≥ 98.0% und Mass Spectrum „Detected“ gegenüber „Conforms to structure“.
- Prüfen Sie, ob beide Ergebnisse dieselbe Probe und Charge nennen.
- Halten Sie jedes Ergebnis mit seiner Methode und seiner eigenen Spezifikation fest.
- Machen Sie aus einem Reinheitswert keine Menge und aus einem Massenergebnis „Detected“ keine Reinheit.
Die Grenzen jedes Berichts beachten
Jeder Bericht gilt nur für die darauf gedruckte Probe und Charge. Prüfen Sie ihn auf der Website des Ausstellers und gleichen Sie die Chargennummer mit der gelieferten Ware ab.
Der Aussteller (TJQXGD) gibt an, dass die Daten von einem externen Partnerlabor stammen, dass weder er noch das Labor eine CMA/CNAS-Akkreditierung besitzt und dass dieses Dokument keine rechtliche Zertifizierungswirkung hat. Der Aussteller (PRISTINBIO) gibt an, dass die Analyse nur der Information dient und sich auf die eingereichte Probe bezieht.
Fordern Sie die Dokumente für die genaue Charge in Ihrem Angebot an. Ein Bericht beschreibt nur die geprüfte Charge – prüfen Sie, ob seine Chargennummer mit der gelieferten Charge übereinstimmt.
Nur für Laborforschung. Nicht zur Anwendung an Menschen oder Tieren.