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HPLC 纯度与质谱:各自说明什么

肽类检测报告上的 HPLC 纯度百分比和质谱结果各自能说明什么、都说明不了什么,以及如何把两项结果放在一起阅读。

两项结果回答不同的问题

肽类检测报告通常并列两项分析结果:高效液相色谱(HPLC)给出的纯度百分比,以及质谱(MS)结果。HPLC 把样品中的各组分分开,报告检测到的信号中有多少落在主峰上;质谱测量所含分子的质量,说明是否检出与预期化合物相符的质量。请按每项结果实际测量的内容来阅读,二者不能相互替代。

HPLC 纯度与质谱对比
要点HPLC 纯度质谱
测量什么检测到的信号(通常为紫外吸收)中落在主峰上的比例,以峰面积百分比表示。样品所形成离子的质荷比(m/z)。
能支持什么样品中该方法能分离并检测到的其他组分很少。样品中存在质量与预期相符的分子。
单独不能说明什么主峰是哪种化合物;水分、反离子或检测器看不到的成分。该分子占样品多少,或两个质量相同的分子中是哪一个。
BC10 报告上的写法Purity (LCMS/HPLC):99.87%(指标要求 ≥ 99.0%)Mass Spectrum:Detected(指标要求:Conforms to [M+2H]2⁺, [M-H]-)

HPLC 纯度百分比的含义

在反相 HPLC 中,溶解后的样品流经填充色谱柱,各组分在不同时间流出。检测器(常用的是在肽键有吸收的波长下测量紫外吸收)把每个组分记录为一个峰。纯度数值通常是主峰面积除以全部积分峰的总面积。

这种计算有局限。它只统计该方法能分开、检测器能看到的成分:与主峰同时流出的杂质,或在所选波长下几乎没有吸收的杂质,都不会拉低这个数值。水分和反离子根本不会以肽峰的形式出现,所以纯度并不等于粉末重量中肽所占的比例。数值还取决于方法(色谱柱、梯度、波长和积分设置),因此应结合报告自身的指标要求阅读,有条件时再看色谱图。每个纯度数值都应附带以下信息:

  • 报告上写明的方法,例如 HPLC 或 LC-MS。
  • 报告自身对该项结果的指标要求。
  • 色谱图(如果您需要亲自查看各峰)。

质谱结果的含义

质谱把分子转化为带电离子并测量其质荷比。用电喷雾电离分析的肽常带不止一个电荷,因此同一个分子可能给出多个信号。按报告上的写法,[M+2H]2⁺ 表示分子加上两个质子,[M-H]- 表示分子失去一个质子。

以 BPC-157 为例,化合物资料列出的分子式为 C62H98N16O22,单同位素质量为 1418.7042 Da。据此,[M+2H]2⁺ 离子应出现在 m/z 710.36 附近,[M-H]- 离子应出现在 m/z 1417.70 附近。BC10 报告把结果写为“Detected”,对应的指标要求是“Conforms to [M+2H]2⁺, [M-H]-”,没有印出 m/z 数值。如果您的审核需要实测数值,请索取质谱图。

质量相符是存在预期分子的有力证据,但这一结果是定性的。它不说明该分子占样品多少;分子式相同的分子(例如两个残基位置互换的肽)质量也相同。要确认序列本身,还需要其他技术,例如串联质谱(MS/MS)中的碎裂分析。

把两项结果放在一起读

纯度和质量只有在描述同一个样品时才能互相印证。在 LC-MS 联用分析中,质量是在被分离的峰上测得的,比两项独立检测联系更紧密。PRISTINBIO 出具的 ARA-290 10 mg 报告 COA-1AvcSX-K-0F(批号 20260905)与 BC10 报告结构相同、指标要求不同:Peptide Purity (HPLC) 为 99.77 %,指标要求 ≥ 98.0%;Mass Spectrum 为“Detected”,指标要求为“Conforms to structure”。

  • 核对两项结果是否指向同一样品和批号。
  • 每项结果都与其方法和自身的指标要求一起记录。
  • 不要把纯度百分比换算成含量,也不要把质谱的“Detected”当作纯度。

保留每份报告的局限

每份报告只说明报告上所印的样品和批次。请在出具方网站上核验,并核对批号与您收到的货物是否一致。

出具方(TJQXGD)声明:检测数据由第三方合作实验室提供,出具方及合作实验室均不持有 CMA/CNAS 认证资质,本文件不具有法定证明效力。出具方(PRISTINBIO)声明:本分析仅供参考,只适用于所送样品。

请在询价时索取报价所对应批次的文件。一份报告只说明它检测的那一批,请核对报告上的批号与您收到的批号是否一致。

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