Два результата отвечают на разные вопросы
В отчёте об анализе пептида обычно рядом стоят два аналитических результата: процент чистоты по жидкостной хроматографии (ВЭЖХ, HPLC) и результат масс-спектрометрии (MS). ВЭЖХ разделяет компоненты образца и показывает, какая доля зарегистрированного сигнала приходится на основной пик. Масс-спектрометрия измеряет массу присутствующих молекул и показывает, найдена ли масса, соответствующая ожидаемому соединению. Читайте каждый результат по тому, что он измеряет; один не заменяет другой.
| Пункт | Чистота по ВЭЖХ | Масс-спектрометрия |
|---|---|---|
| Что измеряется | Доля зарегистрированного сигнала, обычно УФ-поглощения, приходящаяся на основной пик, в процентах площади. | Отношение массы к заряду (m/z) ионов, образованных из образца. |
| Что подтверждает | Что в образце мало других компонентов, которые метод разделяет и регистрирует. | Что присутствует молекула с ожидаемой массой. |
| Чего не показывает сама по себе | Какое соединение образует основной пик; воду, противоионы и всё, что детектор не видит. | Какую долю образца составляет эта молекула и какая из двух молекул одинаковой массы присутствует. |
| В отчёте BC10 | Purity (LCMS/HPLC): 99.87% (требование ≥ 99.0%) | Mass Spectrum: Detected (требование: Conforms to [M+2H]2⁺, [M-H]-) |
Что означает процент чистоты по ВЭЖХ
В обращённо-фазовой ВЭЖХ растворённый образец проходит через заполненную колонку, и его компоненты выходят из неё в разное время. Детектор, чаще всего измеряющий УФ-поглощение на длине волны, где поглощают пептидные связи, записывает каждый компонент как пик. Значение чистоты обычно равно площади основного пика, делённой на общую площадь всех проинтегрированных пиков.
У такого расчёта есть пределы. Он учитывает только то, что метод разделяет и детектор видит: примесь, выходящая из колонки вместе с основным пиком или почти не поглощающая на выбранной длине волны, значение не снижает. Вода и противоионы вообще не дают пептидных пиков, поэтому чистота — это не доля массы порошка, приходящаяся на пептид. Значение также зависит от метода (колонка, градиент, длина волны, параметры интегрирования), поэтому его следует читать вместе с требованием самого отчёта и, если есть, с хроматограммой. Сохраняйте вместе с каждым значением чистоты:
- Метод, указанный в отчёте, например HPLC или LC-MS.
- Требование самого отчёта к этому результату.
- Хроматограмму, если вам нужно самим увидеть пики.
Что означает результат масс-спектра
Масс-спектрометрия превращает молекулы в заряженные ионы и измеряет отношение их массы к заряду. Пептиды, анализируемые с ионизацией электрораспылением, часто несут больше одного заряда, поэтому одна и та же молекула может давать несколько сигналов. В обозначениях отчётов [M+2H]2⁺ — молекула с двумя присоединёнными протонами, а [M-H]- — молекула, потерявшая один протон.
Для BPC-157 в профиле соединения указаны формула C62H98N16O22 и моноизотопная масса 1418.7042 Da. Отсюда ион [M+2H]2⁺ ожидается около m/z 710.36, а ион [M-H]- — около m/z 1417.70. В отчёте BC10 результат указан как «Detected» при требовании «Conforms to [M+2H]2⁺, [M-H]-», значения m/z не напечатаны. Если для вашей проверки нужны наблюдаемые значения, запросите спектр.
Совпадение массы — веское свидетельство присутствия ожидаемой молекулы, но результат качественный. Он не говорит, какую долю образца составляет эта молекула, а молекулы с одинаковой формулой, например пептид с двумя переставленными остатками, имеют одинаковую массу. Для подтверждения самой последовательности нужны другие методы, например фрагментация в тандемной масс-спектрометрии (MS/MS).
Читайте оба результата вместе
Чистота и масса подкрепляют друг друга, только если описывают один и тот же образец. В сопряжённом анализе LC-MS масса измеряется на разделяемых пиках, что связывает оба результата теснее, чем два независимых испытания. Отчёт ARA-290 10 mg COA-1AvcSX-K-0F от PRISTINBIO (партия 20260905) построен так же, как отчёт BC10, но с другим требованием: Peptide Purity (HPLC) 99.77 % при требовании ≥ 98.0% и Mass Spectrum «Detected» при требовании «Conforms to structure».
- Проверьте, что оба результата относятся к одному образцу и одной партии.
- Храните каждый результат вместе с его методом и собственным требованием.
- Не превращайте процент чистоты в количество, а результат масс-спектра «Detected» — в чистоту.
Учитывайте пределы каждого отчёта
Каждый отчёт относится только к указанным в нём образцу и партии. Проверьте его на сайте выдавшей организации и сверьте номер партии с полученным товаром.
Выдавшая организация (TJQXGD) указывает, что данные получены от сторонней партнёрской лаборатории, ни она, ни лаборатория не имеют аккредитации CMA/CNAS, и документ не имеет юридической силы сертификата. Выдавшая организация (PRISTINBIO) указывает, что анализ носит информационный характер и относится к предоставленному образцу.
Запросите документы на ту партию, которая указана в вашем предложении. Отчёт описывает только проверенную партию, поэтому сверьте номер партии в нём с номером полученной партии.
Только для лабораторных исследований. Не для применения у людей или животных.