فحص الذيفان الداخلي: ما هو وكيف يعمل اختبار ⁨LAL⁩

ما هو الذيفان الداخلي

الذيفانات الداخلية (الإندوتوكسينات) هي عديدات السكاريد الشحمية (⁨LPS⁩)، وهي جزيئات كبيرة يتكون منها جزء كبير من الغشاء الخارجي للبكتيريا سلبية الغرام مثل ⁨Escherichia coli⁩. وتنطلق عندما تنمو البكتيريا أو تنقسم أو تموت، وهي شديدة الثبات: فالتعقيم المعتاد بالأوتوكلاف لا يدمرها، والتجفيف بالتجميد لا يزيلها، وهي تمر عبر مرشحات ⁨0.2 µm⁩ المستخدمة لحجز البكتيريا. لذلك قد تكون المادة معقمة وتحتوي مع ذلك على ذيفان داخلي.

وفي المختبر تهم الذيفانات الداخلية لأن كميات ضئيلة جدًا منها تنشّط الخلايا المناعية مثل البلاعم، ولا سيما عبر المستقبل ⁨TLR4⁩. وفي زراعة الخلايا وغيرها من الأعمال على الأنظمة البيولوجية، قد يغيّر الذيفان الداخلي الذي يدخل مع كاشف ما النتائجَ، فتُنسب خطأً إلى المادة قيد الدراسة.

من أين يأتي الذيفان الداخلي

لأن التجفيف لا يزيل الذيفان الداخلي، فإن مستواه في المسحوق المجفف بالتجميد يعكس ما كان في المحلول قبل التجفيف بالتجميد. ويدخل الذيفان الداخلي مع كل ما لامس البكتيريا:

• الماء المستخدم في التخليق أو التنقية أو الشطف.
• المحاليل المنظمة والأملاح والكواشف الأخرى.
• الأدوات الزجاجية والأنابيب والبلاستيك غير المصنوعة خالية من الذيفان الداخلي.
• التداول أثناء التعبئة والتغليف.

كيف يعمل اختبار ⁨LAL⁩

الطريقة القياسية هي اختبار محلّل الخلايا الأميبية لسرطان حدوة الحصان (⁨LAL⁩). ويُحضَّر كاشفه من خلايا دم سرطان حدوة الحصان، الذي ينطلق نظام التخثر لديه بفعل الذيفان الداخلي: إذ ينشّط الذيفان الداخلي العامل ⁨C⁩، فيبدأ سلسلة إنزيمية تنتهي بتكوّن خثرة. وتختلف صيغ الاختبار في طريقة قراءة هذا التفاعل.

ويشمل كل تشغيل معايير للذيفان الداخلي وفحصًا للتأكد من أن العينة نفسها لا تثبط التفاعل ولا تعززه، عادة بإضافة كمية معروفة من الذيفان الداخلي إلى العينة وقياس الكمية المستعادة. وقد تتداخل الببتيدات وأيونات الفلزات وقيم ⁨pH⁩ المتطرفة مع الاختبار، لذلك كثيرًا ما تخفف المختبرات العينة حتى يزول التداخل.

وحدات الذيفان الداخلي: ⁨EU⁩ لكل قارورة ولكل ⁨mg⁩ ولكل ⁨mL⁩

تُذكر النتائج بوحدات الذيفان الداخلي (⁨EU⁩)، وهي مقياس للنشاط مقارنة بذيفان داخلي مرجعي؛ وبالنسبة إلى المعيار المرجعي المعتاد تعادل ⁨1 EU⁩ نحو ⁨0.1⁩ إلى ⁨0.2 ng⁩ من الذيفان الداخلي. ويمكن أن تُذكر النتيجة لكل قارورة أو لكل مليغرام من المادة أو لكل مليلتر من المحلول. ولمقارنة نتيجة لكل قارورة بحد لكل مليغرام، اقسمها على كمية المادة في القارورة، مستخدمًا المحتوى المقيس إذا ذكره التقرير.

والنتيجة التي تقل عن أدنى نقطة في المنحنى المعياري تُذكر على أنها أقل من تلك القيمة، مثل ⁨< 0.005 EU/mL⁩، لا على أنها صفر. ولا يوجد حد واحد للذيفان الداخلي في المواد البحثية: قارن النتيجة بالحد الذي يتطلبه بروتوكولك أو نظامك الخلوي، وبالوحدة نفسها.

نتائج الذيفان الداخلي في تقاريرنا

على سبيل المثال، تتضمن التقارير التالية من مكتبة تقاريرنا نتيجة للذيفان الداخلي. ويذكر كل منها النتيجة لكل قارورة وكمية مقيسة من المادة، فيمكن حساب قيمة لكل مليغرام.

تذكر هذه التقارير نتيجة الذيفان الداخلي دون مواصفة بجانبها، فالنتيجة إذن قياس وليست مطابقة لحد ما. وعمود «لكل ⁨mg⁩» في الجدول حساب أجريناه بأنفسنا من القيمتين المطبوعتين، وهو غير مطبوع على التقارير. وإذا كان عملك يعتمد على الطريقة، فاسأل الجهة المصدِرة عن الطريقة المستخدمة.

تذكر الجهة المصدِرة (TJQXGD) أن البيانات مقدَّمة من مختبر شريك خارجي، وأنها والمختبر لا يحملان اعتماد CMA/CNAS، وأن هذه الوثيقة ليست لها صفة إثبات قانونية. يغطي كل تقرير العينة والدفعة المطبوعتين عليه فقط. تحقق منه على موقع الجهة المصدِرة وتأكد من تطابق رقم الدفعة مع البضاعة التي تستلمها.

ما الذي تطلبه عندما يكون الذيفان الداخلي مهمًا

اطلب وثائق الدفعة المحددة في عرض السعر. التقرير يصف الدفعة التي فُحصت فقط، لذا تحقق من أن رقم الدفعة فيه يطابق الدفعة التي تستلمها.

• نتيجة الذيفان الداخلي للدفعة التي تستلمها تحديدًا، مع وحدتها.
• الطريقة (التخثر الهلامي أو العكارة أو اللونية أو العامل ⁨C⁩ المؤتلف) وحساسيتها أو نطاق المنحنى المعياري.
• هل اجتاز فحص التثبيط والتعزيز.
• الحد الذي يحتاجه بروتوكولك، بالوحدة نفسها التي ذُكرت بها النتيجة.
• ماء وأدوات زجاجية وبلاستيك خالية من الذيفان الداخلي لعملك الخاص، حتى لا يُضاف ذيفان داخلي بعد الاستلام.