内毒素检测：什么是内毒素，LAL 法如何检测

什么是内毒素

内毒素是脂多糖（LPS），是构成大肠杆菌（Escherichia coli）等革兰氏阴性菌外膜主要部分的大分子。细菌生长、分裂或死亡时都会释放内毒素，而且它非常稳定：常规高压灭菌不能破坏它，冻干不能除去它，它还能穿过用于除菌的 0.2 µm 滤膜。因此，一种材料可以是无菌的，却仍含有内毒素。

在实验室中，内毒素之所以重要，是因为极少量的内毒素就能激活巨噬细胞等免疫细胞，主要通过 TLR4 受体。在细胞培养和其他涉及生物体系的工作中，随试剂带入的内毒素可能改变实验结果，而这些变化又会被误认为是所研究的材料造成的。

内毒素从哪里来

干燥不能除去内毒素，所以冻干粉中的内毒素水平反映的是冻干前溶液中已有的量。凡是接触过细菌的东西都可能带入内毒素：

• 合成、纯化或冲洗用水。
• 缓冲液、盐类和其他试剂。
• 未经去内毒素处理的玻璃器皿、管路和塑料制品。
• 灌装和包装过程中的操作。

LAL 法如何检测

标准方法是鲎试剂（LAL，Limulus amebocyte lysate）法。其试剂取自鲎的血细胞，鲎的凝血系统会被内毒素触发：内毒素激活 C 因子，启动一连串酶促反应，最后形成凝块。各种检测方式的区别在于如何读取这一反应。

每次检测都包括内毒素标准品，并检查样品本身是否抑制或增强该反应，通常的做法是向样品中加入已知量的内毒素，再测定回收了多少。肽、金属离子和极端 pH 都可能产生干扰，所以实验室常把样品稀释到不再干扰为止。

内毒素单位：每瓶、每 mg 和每 mL 的 EU

结果以内毒素单位（EU）表示，这是相对于参考内毒素的活性单位；对常用的参考标准品而言，1 EU 大约相当于 0.1 至 0.2 ng 内毒素。结果可以按每瓶、每毫克材料或每毫升溶液表示。要把每瓶的结果与每毫克的限值比较，请除以瓶中材料的量；如果报告给出了实测含量，就用实测含量。

低于标准曲线最低点的结果报告为小于该值，例如 < 0.005 EU/mL，而不是零。研究材料没有统一的内毒素限值：请把结果与您自己的实验方案或细胞体系所需的限值比较，并使用相同的单位。

我们报告上的内毒素结果

例如，我们报告库中的下列报告都有内毒素结果。每份报告都给出每瓶的结果和实测的材料量，因此可以算出每毫克的数值。

这些报告的内毒素结果旁边没有规格，所以它是一个测量值，而不是对照某个限值得出的“合格”判定。表中“每 mg”一栏是我们根据报告上印出的两个数值自行计算的，报告上并没有这一栏。如果您的工作取决于检测方法，请向出具方询问所用的方法。

出具方（TJQXGD）声明：检测数据由第三方合作实验室提供，出具方及合作实验室均不持有 CMA/CNAS 认证资质，本文件不具有法定证明效力。 每份报告只说明报告上所印的样品和批次。请在出具方网站上核验，并核对批号与您收到的货物是否一致。

内毒素很重要时应索取哪些信息

请在询价时索取报价所对应批次的文件。一份报告只说明它检测的那一批，请核对报告上的批号与您收到的批号是否一致。

• 您收到的那一批次的内毒素结果及其单位。
• 检测方法（凝胶法、浊度法、显色法或重组 C 因子法），以及其灵敏度或标准曲线范围。
• 抑制和增强检查是否通过。
• 您的实验方案所需的限值，并与结果使用相同的单位。
• 在您自己的工作中使用无内毒素的水、玻璃器皿和塑料制品，以免收货后再引入内毒素。