Was Endotoxine sind
Endotoxine sind Lipopolysaccharide (LPS), große Moleküle, die einen großen Teil der äußeren Membran gramnegativer Bakterien wie Escherichia coli bilden. Sie werden frei, wenn Bakterien wachsen, sich teilen oder absterben, und sie sind sehr stabil: Übliches Autoklavieren zerstört sie nicht, Gefriertrocknung entfernt sie nicht, und sie passieren die Filter mit 0.2 µm Porenweite, mit denen Bakterien zurückgehalten werden. Ein Material kann daher steril sein und trotzdem Endotoxin enthalten.
Im Labor sind Endotoxine wichtig, weil schon sehr kleine Mengen Immunzellen wie Makrophagen aktivieren, vor allem über den Rezeptor TLR4. In der Zellkultur und bei anderen Arbeiten mit biologischen Systemen kann Endotoxin, das mit einem Reagenz eingetragen wird, Ergebnisse verändern, die dann fälschlich dem untersuchten Material zugeschrieben werden.
Woher Endotoxin kommt
Da Trocknen Endotoxin nicht entfernt, spiegelt der Gehalt in einem lyophilisierten Pulver wider, was vor der Gefriertrocknung in der Lösung war. Endotoxin gelangt mit allem hinein, was mit Bakterien in Kontakt war:
- Wasser für Synthese, Reinigung oder Spülung.
- Puffer, Salze und andere Reagenzien.
- Glaswaren, Schläuche und Kunststoffe, die nicht endotoxinfrei hergestellt sind.
- Handhabung beim Abfüllen und Verpacken.
Wie der LAL-Test funktioniert
Die Standardmethode ist der Limulus-Amöbozyten-Lysat-Test (LAL). Sein Reagenz wird aus Blutzellen des Pfeilschwanzkrebses gewonnen, dessen Gerinnungssystem durch Endotoxin ausgelöst wird: Endotoxin aktiviert Faktor C, der eine Enzymkaskade startet, an deren Ende ein Gerinnsel steht. Die Testvarianten unterscheiden sich darin, wie sie diese Reaktion ablesen.
Jeder Lauf enthält Endotoxinstandards und eine Prüfung, ob die Probe selbst die Reaktion hemmt oder verstärkt, meist indem der Probe eine bekannte Menge Endotoxin zugesetzt und die wiedergefundene Menge gemessen wird. Peptide, Metallionen und extreme pH-Werte können stören; Labore verdünnen eine Probe daher oft, bis die Störung verschwindet.
| Methode | Was abgelesen wird | Art des Ergebnisses |
|---|---|---|
| Gel-Clot | Ob sich nach der Inkubation ein festes Gel bildet. | Über oder unter der angegebenen Empfindlichkeit des Reagenzes; eine Verdünnungsreihe ergibt einen Endpunktwert. |
| Kinetisch-turbidimetrisch | Wie schnell die Mischung trüb wird. | Ein Wert, der an einer Standardkurve abgelesen wird. |
| Chromogen | Gelbe Farbe, die aus einem synthetischen Substrat freigesetzt wird. | Ein Wert, der an einer Standardkurve abgelesen wird. |
| Rekombinanter Faktor C (rFC) | Fluoreszenz eines Substrats, das rekombinanter Faktor C spaltet. | Ein Wert, der an einer Standardkurve abgelesen wird, ohne Blut des Pfeilschwanzkrebses. |
Endotoxin-Einheiten: EU pro Fläschchen, pro mg und pro mL
Ergebnisse werden in Endotoxin-Einheiten (EU) angegeben, einem Maß der Aktivität gegenüber einem Referenz-Endotoxin; beim üblichen Referenzstandard entspricht 1 EU etwa 0.1 bis 0.2 ng Endotoxin. Ein Ergebnis kann pro Fläschchen, pro Milligramm Material oder pro Milliliter Lösung angegeben sein. Um ein Ergebnis pro Fläschchen mit einem Grenzwert pro Milligramm zu vergleichen, teilen Sie es durch die Materialmenge im Fläschchen, möglichst durch den gemessenen Gehalt, wenn der Bericht ihn nennt.
Ein Ergebnis unter dem niedrigsten Punkt der Standardkurve wird als kleiner als dieser Wert angegeben, etwa < 0.005 EU/mL, nicht als null. Es gibt keinen einheitlichen Endotoxin-Grenzwert für Forschungsmaterialien: Vergleichen Sie das Ergebnis mit dem Grenzwert, den Ihr eigenes Protokoll oder Zellsystem verlangt, in derselben Einheit.
Die Endotoxinergebnisse auf unseren Berichten
Die folgenden Berichte aus unserer Berichtsbibliothek enthalten zum Beispiel ein Endotoxinergebnis. Jeder nennt das Ergebnis pro Fläschchen und eine gemessene Materialmenge, sodass sich ein Wert pro Milligramm berechnen lässt.
Diese Berichte nennen das Endotoxinergebnis ohne Spezifikation daneben; das Ergebnis ist also ein Messwert und keine Konformität mit einem Grenzwert. Die Spalte pro mg in der Tabelle ist unsere eigene Rechnung aus den beiden gedruckten Werten und steht nicht auf den Berichten. Wenn Ihre Arbeit von der Methode abhängt, fragen Sie den Aussteller, welche verwendet wurde.
Der Aussteller (TJQXGD) gibt an, dass die Daten von einem externen Partnerlabor stammen, dass weder er noch das Labor eine CMA/CNAS-Akkreditierung besitzt und dass dieses Dokument keine rechtliche Zertifizierungswirkung hat. Jeder Bericht gilt nur für die darauf gedruckte Probe und Charge. Prüfen Sie ihn auf der Website des Ausstellers und gleichen Sie die Chargennummer mit der gelieferten Ware ab.
| Bericht | Endotoxin, wie gedruckt | Menge, wie gedruckt | Pro mg (unsere Rechnung) |
|---|---|---|---|
| SNAP-8 10 mg, NP8 10-20260914S8218 | 0.259 EU/vial | Nettogehalt 10.85 mg | etwa 0.024 EU/mg |
| NAD+ 1000 mg, NAD1000-20260914S8218 | 1.156 EU/Vial | Nettogehalt 1034.21 mg | etwa 0.0011 EU/mg |
| Glutathione 1500 mg, GTT1500-20260907S7260 | 1.037 EU/Vial | Peptidgewicht 1464.81 mg | etwa 0.00071 EU/mg |
Was Sie anfordern sollten, wenn Endotoxin wichtig ist
Fordern Sie die Dokumente für die genaue Charge in Ihrem Angebot an. Ein Bericht beschreibt nur die geprüfte Charge – prüfen Sie, ob seine Chargennummer mit der gelieferten Charge übereinstimmt.
- Das Endotoxinergebnis für genau die Charge, die Sie erhalten, mit Einheit.
- Die Methode (Gel-Clot, turbidimetrisch, chromogen oder rekombinanter Faktor C) und ihre Empfindlichkeit oder den Bereich der Standardkurve.
- Ob die Prüfung auf Hemmung und Verstärkung bestanden wurde.
- Den Grenzwert, den Ihr Protokoll braucht, in derselben Einheit wie das Ergebnis.
- Endotoxinfreies Wasser, Glaswaren und Kunststoffe für Ihre eigene Arbeit, damit nach dem Wareneingang kein Endotoxin hinzukommt.
Nur für Laborforschung. Nicht zur Anwendung an Menschen oder Tieren.