Qué son las endotoxinas
Las endotoxinas son lipopolisacáridos (LPS), moléculas grandes que forman gran parte de la membrana externa de las bacterias gramnegativas, como Escherichia coli. Se liberan cuando las bacterias crecen, se dividen o mueren, y son muy estables: el autoclavado habitual no las destruye, la liofilización no las elimina y atraviesan los filtros de 0.2 µm que se usan para retener bacterias. Por eso un material puede ser estéril y aun así contener endotoxinas.
En el laboratorio, las endotoxinas importan porque cantidades muy pequeñas activan células inmunitarias como los macrófagos, sobre todo a través del receptor TLR4. En cultivo celular y en otros trabajos con sistemas biológicos, la endotoxina que llega con un reactivo puede cambiar resultados que luego se atribuyen por error al material estudiado.
De dónde vienen las endotoxinas
Como el secado no elimina las endotoxinas, el nivel en un polvo liofilizado refleja lo que había en la solución antes de liofilizarla. Las endotoxinas entran con todo lo que ha estado en contacto con bacterias:
- El agua usada en la síntesis, la purificación o el enjuague.
- Tampones, sales y otros reactivos.
- Material de vidrio, tubos y plásticos que no están fabricados libres de endotoxinas.
- La manipulación durante el llenado y el envasado.
Cómo funciona la prueba LAL
El método de referencia es la prueba del lisado de amebocitos de Limulus (LAL). Su reactivo se obtiene de células sanguíneas del cangrejo herradura, cuyo sistema de coagulación se activa con la endotoxina: la endotoxina activa el factor C, que inicia una cascada enzimática que termina en un coágulo. Las variantes de la prueba se diferencian en cómo leen esa reacción.
Cada ensayo incluye estándares de endotoxina y una comprobación de que la propia muestra no inhibe ni potencia la reacción, normalmente añadiendo a la muestra una cantidad conocida de endotoxina y midiendo cuánta se recupera. Los péptidos, los iones metálicos y los pH extremos pueden interferir, por lo que los laboratorios suelen diluir la muestra hasta que deja de hacerlo.
| Método | Qué se lee | Tipo de resultado |
|---|---|---|
| Gel-clot (coágulo en gel) | Si se forma un gel firme tras la incubación. | Por encima o por debajo de la sensibilidad declarada del reactivo; una serie de diluciones da un valor de punto final. |
| Turbidimétrico cinético | Con qué rapidez se enturbia la mezcla. | Un valor leído en una curva estándar. |
| Cromogénico | El color amarillo liberado de un sustrato sintético. | Un valor leído en una curva estándar. |
| Factor C recombinante (rFC) | La fluorescencia de un sustrato cortado por el factor C recombinante. | Un valor leído en una curva estándar, sin sangre de cangrejo herradura. |
Unidades de endotoxina: EU por vial, por mg y por mL
Los resultados se expresan en unidades de endotoxina (EU), una medida de actividad frente a una endotoxina de referencia; para el estándar de referencia habitual, 1 EU equivale aproximadamente a 0.1 a 0.2 ng de endotoxina. Un resultado puede darse por vial, por miligramo de material o por mililitro de solución. Para comparar un resultado por vial con un límite por miligramo, divídalo por la cantidad de material del vial, usando el contenido medido si el informe lo indica.
Un resultado por debajo del punto más bajo de la curva estándar se informa como menor que ese valor, por ejemplo < 0.005 EU/mL, no como cero. No existe un límite único de endotoxinas para materiales de investigación: compare el resultado con el límite que requieren su propio protocolo o su sistema celular, expresado en la misma unidad.
Los resultados de endotoxinas en nuestros informes
Por ejemplo, los informes siguientes de nuestra biblioteca de informes incluyen un resultado de endotoxinas. Cada uno da el resultado por vial y una cantidad medida de material, de modo que puede calcularse un valor por miligramo.
Estos informes dan el resultado de endotoxinas sin una especificación al lado, así que el resultado es una medición y no una conformidad frente a un límite. La columna por mg de la tabla es nuestro propio cálculo a partir de los dos valores impresos; no figura en los informes. Si su trabajo depende del método, pregunte al emisor cuál se usó.
El emisor (TJQXGD) declara que los datos proceden de un laboratorio asociado externo, que ni él ni el laboratorio tienen acreditación CMA/CNAS y que este documento no tiene validez de certificación legal. Cada informe solo cubre la muestra y el lote impresos en él. Verifíquelo en el sitio web del emisor y compruebe que el número de lote coincide con la mercancía que recibe.
| Informe | Endotoxinas, tal como se imprimen | Cantidad, tal como se imprime | Por mg (nuestro cálculo) |
|---|---|---|---|
| SNAP-8 10 mg, NP8 10-20260914S8218 | 0.259 EU/vial | Contenido neto 10.85 mg | aprox. 0.024 EU/mg |
| NAD+ 1000 mg, NAD1000-20260914S8218 | 1.156 EU/Vial | Contenido neto 1034.21 mg | aprox. 0.0011 EU/mg |
| Glutathione 1500 mg, GTT1500-20260907S7260 | 1.037 EU/Vial | Peso de péptido 1464.81 mg | aprox. 0.00071 EU/mg |
Qué pedir cuando las endotoxinas importan
Solicite los documentos del lote exacto de su cotización. Un informe solo describe el lote analizado, así que compruebe que su número de lote coincide con el lote que recibe.
- El resultado de endotoxinas del lote exacto que recibe, con su unidad.
- El método (gel-clot, turbidimétrico, cromogénico o factor C recombinante) y su sensibilidad o el rango de la curva estándar.
- Si se superó la comprobación de inhibición y potenciación.
- El límite que necesita su protocolo, en la misma unidad que el resultado.
- Agua, material de vidrio y plásticos libres de endotoxinas para su propio trabajo, para no añadir endotoxinas después de la recepción.
Solo investigación de laboratorio. No apto para uso humano ni animal.