Ce que sont les endotoxines
Les endotoxines sont des lipopolysaccharides (LPS), de grosses molécules qui constituent une grande partie de la membrane externe des bactéries à Gram négatif, comme Escherichia coli. Elles sont libérées lorsque les bactéries se multiplient, se divisent ou meurent, et elles sont très stables : l’autoclavage habituel ne les détruit pas, la lyophilisation ne les élimine pas et elles traversent les filtres de 0.2 µm utilisés pour retenir les bactéries. Un produit peut donc être stérile et contenir malgré tout des endotoxines.
Au laboratoire, les endotoxines comptent parce que de très petites quantités activent des cellules immunitaires comme les macrophages, principalement par le récepteur TLR4. En culture cellulaire et dans d’autres travaux sur des systèmes biologiques, l’endotoxine apportée par un réactif peut modifier des résultats qui sont ensuite attribués à tort au produit étudié.
D’où viennent les endotoxines
Comme le séchage n’élimine pas les endotoxines, le niveau dans une poudre lyophilisée reflète ce que contenait la solution avant la lyophilisation. Les endotoxines entrent avec tout ce qui a été en contact avec des bactéries :
- L’eau utilisée pour la synthèse, la purification ou le rinçage.
- Les tampons, sels et autres réactifs.
- La verrerie, les tubulures et les plastiques qui ne sont pas fabriqués exempts d’endotoxines.
- Les manipulations pendant le remplissage et le conditionnement.
Comment fonctionne le test LAL
La méthode de référence est le test au lysat d’amœbocytes de limule (LAL). Son réactif est obtenu à partir de cellules sanguines de la limule, dont le système de coagulation est déclenché par l’endotoxine : l’endotoxine active le facteur C, qui lance une cascade enzymatique aboutissant à un caillot. Les variantes du test diffèrent par la façon dont elles lisent cette réaction.
Chaque série comprend des étalons d’endotoxine et un contrôle vérifiant que l’échantillon lui-même n’inhibe ni ne renforce la réaction, généralement en ajoutant à l’échantillon une quantité connue d’endotoxine et en mesurant la part retrouvée. Les peptides, les ions métalliques et les pH extrêmes peuvent interférer ; les laboratoires diluent donc souvent l’échantillon jusqu’à ce que l’interférence disparaisse.
| Méthode | Ce qui est lu | Type de résultat |
|---|---|---|
| Gélification (gel-clot) | La formation ou non d’un gel ferme après incubation. | Au-dessus ou au-dessous de la sensibilité déclarée du réactif ; une série de dilutions donne une valeur de point final. |
| Turbidimétrique cinétique | La vitesse à laquelle le mélange se trouble. | Une valeur lue sur une courbe d’étalonnage. |
| Chromogénique | La couleur jaune libérée par un substrat synthétique. | Une valeur lue sur une courbe d’étalonnage. |
| Facteur C recombinant (rFC) | La fluorescence d’un substrat clivé par le facteur C recombinant. | Une valeur lue sur une courbe d’étalonnage, sans sang de limule. |
Unités d’endotoxine : EU par flacon, par mg et par mL
Les résultats sont exprimés en unités d’endotoxine (EU), une mesure d’activité par rapport à une endotoxine de référence ; pour l’étalon de référence habituel, 1 EU correspond environ à 0.1 à 0.2 ng d’endotoxine. Un résultat peut être donné par flacon, par milligramme de produit ou par millilitre de solution. Pour comparer un résultat par flacon à une limite par milligramme, divisez-le par la quantité de produit dans le flacon, en utilisant la teneur mesurée si le rapport l’indique.
Un résultat inférieur au point le plus bas de la courbe d’étalonnage est rendu comme inférieur à cette valeur, par exemple < 0.005 EU/mL, et non comme zéro. Il n’existe pas de limite unique d’endotoxines pour les produits de recherche : comparez le résultat à la limite requise par votre propre protocole ou votre système cellulaire, exprimée dans la même unité.
Les résultats d’endotoxines de nos rapports
Par exemple, les rapports ci-dessous de notre bibliothèque de rapports comportent un résultat d’endotoxines. Chacun donne le résultat par flacon et une quantité mesurée de produit, ce qui permet de calculer une valeur par milligramme.
Ces rapports donnent le résultat d’endotoxines sans spécification en regard : le résultat est donc une mesure, et non une conformité à une limite. La colonne par mg du tableau est notre propre calcul à partir des deux valeurs imprimées ; elle ne figure pas sur les rapports. Si votre travail dépend de la méthode, demandez à l’émetteur laquelle a été utilisée.
L’émetteur (TJQXGD) indique que les données proviennent d’un laboratoire partenaire tiers, que ni lui ni le laboratoire ne détiennent d’accréditation CMA/CNAS et que ce document n’a aucune valeur de certification légale. Chaque rapport ne couvre que l’échantillon et le lot qui y sont imprimés. Vérifiez-le sur le site de l’émetteur et contrôlez que le numéro de lot correspond à la marchandise reçue.
| Rapport | Endotoxines, tel qu’imprimé | Quantité, telle qu’imprimée | Par mg (notre calcul) |
|---|---|---|---|
| SNAP-8 10 mg, NP8 10-20260914S8218 | 0.259 EU/vial | Teneur nette 10.85 mg | env. 0.024 EU/mg |
| NAD+ 1000 mg, NAD1000-20260914S8218 | 1.156 EU/Vial | Teneur nette 1034.21 mg | env. 0.0011 EU/mg |
| Glutathione 1500 mg, GTT1500-20260907S7260 | 1.037 EU/Vial | Poids de peptide 1464.81 mg | env. 0.00071 EU/mg |
Ce qu’il faut demander quand les endotoxines comptent
Demandez les documents du lot exact de votre devis. Un rapport ne décrit que le lot analysé : vérifiez que son numéro de lot correspond au lot que vous recevez.
- Le résultat d’endotoxines du lot exact que vous recevez, avec son unité.
- La méthode (gélification, turbidimétrique, chromogénique ou facteur C recombinant) et sa sensibilité ou la plage de la courbe d’étalonnage.
- Si le contrôle d’inhibition et de renforcement est conforme.
- La limite dont votre protocole a besoin, dans la même unité que le résultat.
- De l’eau, de la verrerie et des plastiques exempts d’endotoxines pour votre propre travail, afin de ne pas ajouter d’endotoxines après la réception.
Recherche en laboratoire uniquement. Pas d’usage humain ou animal.